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| 產地 | 進口、國產 |
| 保存條件 | 低溫冷藏 |
| 品牌 | 帛科 |
| 貨號 | E0105 |
| 用途 | 公司產品僅用于科研 |
| 組織來源 | 浸潤性導管癌；女性 |
| 細胞形態 | 詳見說明書 |
| 是否是腫瘤細胞 | 否 |
| CAS編號 | |
| 保質期 | 詳見說明書 |
| 器官來源 | 詳見說明書 |
| 免疫類型 | 詳見說明書 |
| 品系 | 詳見說明書 |
| 生長狀態 | 貼壁 |
| 物種來源 | 人 |
| 包裝規格 | 瓶 |
| 純度 | 詳見說明書% |
| 是否進口 | 是 |
產品簡稱：BT-474 [BT474]細胞
中文名稱：人乳腺導管癌細胞
規格：瓶
種屬：人
來源：浸潤性導管癌；女性
培養基：1640
狀態：貼壁
單位:
貨號：E0105
產品名稱 | 規格 | 貨號 |
BT-474 [BT474]細胞 | 瓶 | E0105 |
帛科細胞培養器材的選擇：從培養量大小來講，從小到大有細胞培養板、細胞反應管、搖瓶、細胞培養瓶、細胞工廠等，更大就是反應器了。
帛科細胞培養瓶培養面積從25-225平方厘米不等，一般都經過表面改性處理，適合細胞貼壁和生長。225ml 、175ml的多用于大規模培養時用（如單克隆細胞的培養等），75ml的多用于一般性細胞實驗用（一般性的傳代，保存細胞，為實驗提供細胞等），25ml一般是用來復蘇細胞或細胞較少時的培養，還有做原代細胞時也可以做多瓶而避免交叉污染。產品僅用于科研
細胞培養的具體步驟和注意事項：
1.細胞復蘇
將凍存細胞從液氮中取出后，在37℃水浴鍋內不斷搖動促進其融化。將融化的細胞移入離心管中，加入37oC預熱的DMEM完全培養基中（其中胎牛血清約為10%），輕輕吹勻，離心，500g離心2min，棄上清液。
加入DMEM完全培養基清洗，棄上清液。加入DMEM完全培養基，輕輕吹打混勻，制成細胞懸液，接種于培養皿/瓶中，在含5% CO2的細胞培養箱中培養。
2.細胞傳代
帛科細胞密度達到80%~90%（過量不足，過晚細胞狀態不佳，1:2至1:10以上的比率傳代培養，一般1:3至1:5細胞一代，即從細胞接種到分離再培養的一段時間，非細胞有絲分裂次數）時，去掉完全培養基，用1X PBS清洗2次。
加入胰蛋白酶（注意：消化液的量以蓋住細胞*，*消化溫度是37oC。顯微鏡下觀察細胞：倒置顯微鏡下觀察消化細胞，若胞質回縮，細胞之間不再連接成片，表明此時細胞消化適度）進行消化，放入細胞培養箱中約2-3min。
加入適量DMEM完全培養基終止胰蛋白酶消化，轉移至離心管后500g離心2min，棄上清液，再加入DMEM完全培養基清洗，棄上清液。
加入DMEM完全培養基，輕輕吹打混勻，吸取10微升進行計數，然后按照所需細胞量在含5% CO2的細胞培養箱繼續培養。
3.細胞凍存
當細胞密度達到80%~90%時，去掉完全培養基，用1X PBS清洗2次。加入胰蛋白酶進行消化，放入細胞培養箱中約2-3min。加入DMEM完全培養基終止胰蛋白酶消化，轉移至離心管后500g離心2min，棄上清液，再加入DMEM完全培養基清洗，棄上清液。加入lml凍存液（90%胎牛血清，10% DMSO。
一般來講血清含量可以在10%-90%之間調整，凍存液中加入血清一方面可以為細胞提供營養，另一方面可以在細胞凍存過程中提供非滲透性保護物質，如蔗糖，白蛋白等從而更好地保護細胞），放入凍存管內（管內有異丙醇，以保證溫度降低的速度），立即放入4oC冰箱中凍存30min，然后放入-20oC冰箱中凍存30min，再置于-80℃冰箱內過夜。
*天放入液氮中，可以保存至少兩年，如不放人液氮，可以保存三個月。
細胞凍存和復蘇的原則是：慢凍速融，這樣更加有利于保持細胞的活力。凍存細胞不加任何保護劑，會導致細胞內冰晶的產生，從而使細胞產生內源性的機械損傷，引起細胞內環境滲透壓，PH，電解質等的改變，進而促使細胞死亡。
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注意事項：
BT-474 [BT474]細胞（1）預熱培養用液：把已經配制好的裝有培養液、PBS和胰蛋白酶的瓶子放入37℃水浴鍋內預熱；
（2）用75%酒精擦拭經過紫外線照射的超凈工作臺和雙手；
（3）正確擺放使用的器械：保證足夠的操作空間，不僅便于操作而且減少污染；
（4）點燃酒精燈：注意火焰不能太小；
（5）嚴格的無菌操作；
（6）貼壁細胞消化適度：消化的時間受消化液的種類、配制時間、加入培養瓶中的量等諸多因素的影響，消化過程中應該注意培養細胞形態的變化，一旦胞質回縮，連接變松散，或有成片浮起的跡象就要立即終止消化；
（7）傳代細胞所有的操作盡量靠近酒精燈火焰。每次*只進行一種細胞的操作，每種細胞使用一套器材。避免交叉感染；
（8）傳代細胞瓶口每次打開或者關閉都需要在酒精燈上消毒。
